Иммунохроматографический анализ

Преимущества иммунохроматографического метода

1. Простота и удобство использования

Иммунохроматографический метод является одним из самых простых и легко применимых методов иммуноанализа. Он не требует специальных навыков и оборудования, что делает его доступным для широкого круга пользователей, включая медицинский персонал, лаборантов и пациентов.

2. Быстрота и скорость анализа

Иммунохроматографический метод позволяет проводить анализ биоматериала и получать результаты в течение нескольких минут

Это особенно важно при проведении экспресс-диагностики в условиях, требующих быстрого определения наличия или отсутствия конкретного аналита в образце

3. Высокая специфичность и чувствительность

Иммунохроматографический метод основан на взаимодействии между антигенами и антителами, что обеспечивает высокую специфичность определения целевого аналита. Данный метод также демонстрирует высокую чувствительность, позволяющую обнаруживать даже низкие концентрации аналита в образце.

4. Возможность квалификационного и количественного анализа

Иммунохроматографический метод может использоваться как для квалификационного, так и для количественного определения целевого аналита. Он позволяет определить только наличие или отсутствие аналита (например, при проведении скрининговых тестов), а также определить его концентрацию в образце.

5. Сохранность и стабильность анализируемого образца

Иммунохроматографический метод не требует предварительной обработки образца, что позволяет сохранить его структуру и состояние

Это особенно важно при анализе биологических образцов, таких как кровь или моча, где сохранность образца является ключевым фактором для получения достоверных результатов

6. Возможность работы на месте и в полевых условиях

Иммунохроматографический метод позволяет проводить анализ на месте, без необходимости отправки образца в лабораторию. Это особенно полезно в случаях, когда требуется быстрый ответ или в условиях, где доступ к лабораторному оборудованию ограничен. Также метод успешно применяется в полевых условиях, что позволяет проводить диагностику и мониторинг на местах возникновения эпидемий, во время рейсов и т.д.

7. Возможность массового скрининга

Иммунохроматографический метод может быть эффективно использован для массового скрининга наличия или отсутствия определенного аналита в образце. Благодаря своей простоте, скорости и доступности, этот метод может быть применен для обследования большого количества людей в кратчайшие сроки.

Итоги

Иммунохроматографический метод является эффективным и многофункциональным инструментом для проведения иммуноанализа. Он обладает рядом преимуществ, включая простоту использования, быстроту анализа, высокую специфичность и чувствительность, возможность квалификационного и количественного анализа, сохранность и стабильность образца, возможность работы на месте и в полевых условиях, а также возможность массового скрининга.

Основные понятия иммунохроматографического метода

Иммунохроматографический метод (ИХМ) — это быстрый и удобный аналитический метод, который основан на использовании специфического взаимодействия антигена и антитела. Данный метод широко применяется в медицине, научных исследованиях, пищевой промышленности и других областях.

Основными понятиями, связанными с иммунохроматографическим методом, являются:

• Антигены и антитела: Антигены — это вещества, которые могут вызывать иммунный ответ в организме. Антитела — это белковые молекулы, которые присутствуют в крови и могут специфически связываться с антигенами. В ИХМ используются специфические антитела, которые способны распознавать и связываться с целевым антигеном.
• Латексные или коллоидные золотые наночастицы: В ИХМ используются наночастицы золота или латекса, которые обычно имеют диаметр от 20 до 40 нм. Наночастицы покрыты антителами, которые связываются с целевым антигеном, образуя комплекс.
• Мембрана тест-полосы: Тест-полоса — это основной элемент ИХМ, содержащий особым образом размещенные реагенты и фильтры. Мембрана тест-полосы обычно состоит из трех слоев: области нанесения пробы, области диффузии и области регистрации результатов. В ИХМ образуется видимый сигнал в области регистрации результатов.
• Капиллярное подвижение: В ИХМ капиллярное подвижение происходит непосредственно в области нанесения пробы на тест-полосу. Пробы попадают на область диффузии и переносятся к области регистрации результатов, где образуется видимый сигнал.
• Положительный и отрицательный контроли: Для проверки правильности работы ИХМ используются положительный и отрицательный контроли. Положительный контроль содержит известное количество целевого антигена, а отрицательный контроль не содержит целевого антигена. Если оба контроля дают ожидаемый результат, то результат ИХМ считается действительным.

Таким образом, ИХМ представляет собой лабораторный метод, который основан на использовании антиген-антитело-взаимодействия. Он отличается высокой скоростью и простотой, что делает его популярным в различных областях

Важно отметить, что ИХМ не является стандартным исследовательским методом, и требует использования специфических реагентов и тест-полос, разработанных для конкретного анализа

Как можно выявить наркотики

Сколько времени после употребления наркотики будут обнаружены в моче?

Марихуана после разового применения держится в ней 3-7 дней. Если ее употребляли долго и систематично, следы распада можно будет обнаружить через несколько недель — все зависит от регулярности дозировок, роста и веса пациента, а также особенностей обмена веществ его организма.

Кокаин и экстази выводятся с мочой 2 суток, амфетамин и метамфетамин — до 3 суток.

Сроки, на протяжении которых можно выявить наркотики в моче, зависят от того, насколько правильно была собрана и как хранилась моча.

При проведении анализов мочи на наркотики как в домашних, так и в лабораторных условиях возможны погрешности. Любая выверенная методика проведения исследований может выдать как ложно-положительный, так и ложно-отрицательный результат.

https://youtube.com/watch?v=uN4G8ZyOYaY

Анализ будет не точным, если после применения наркотика испытуемый употреблял очень много жидкости. В этом случае рекомендуется дополнительно проверить кровь. Исследование мочи на наркотики в личных целях может проводиться анонимно, но если результат анализа планируется как юридический факт, необходимо иметь паспорт или другой документ, удостоверяющий личность. В этом случае забор материала проводят в условиях, исключающих возможность подменить его.

Одним из достоверных является анализ волос, в зависимости от длины которых можно определить, употреблял ли человек наркотические вещества последние полгода. Пучок (не менее 100 штук) отстригают у самых корней. Если проведенный анализ показал положительный результат, а вы знаете, что не употребляли наркотические вещества и их следов никак не может быть в вашем организме, используйте другие методы и отстаивайте свои права.

Расшифровка иммунохимического анализа крови при бесплодии

Оценка результата исследования позволяет врачу установить причину появившейся проблемы и принять меры по ее устранению. Для установления причины бесплодия врач расшифровывает уровень гормонов. Лютеотропин помогает нормальному функционированию половых желез. Его повышенный уровень свидетельствует о появлении нарушений в их работе. В процессе обследования устанавливают свободный F3 и общий F2 эстриол. Резкое уменьшение его количества при беременности указывает на патологию в формировании и развитии плода.

При расшифровке используют значения уровня В-ХГЧ и АФП (альфа-фетопротин). Кровь на уровень прогестерона сдают в одно и то же время суток. Исключаются накануне исследования:

• стрессовые ситуации;
• прием алкоголя;
• курение;
• питание жирными продуктами.

Метки, используемые в ИХА

В качестве меток в ИХА используются различные частицы, обладающие следующими свойствами:

1. Красящие вещества (нано-частицы коллоидного золота или углерода, или частицы окрашенного латекса). В этом случае используется визуальная детекция результата, либо приборное колориметрическое определение (или сканирование). Использование различных красящих меток, присоединенных к частицам латекса, позволяет проводить мильтианализ, в котором линии разного цвета соответствуют различным аналитам. Наиболее часто используемой меткой является нано-частицы коллоидного золота.
2. Флуоресцентные, фосфоресцентные и биолюминисцентные метки, ковалентно связанные с частицами латекса. Эти метки используются только в приборных вариантах ИХА, когда результат регистрируется специальным считывателем (датчиком). Среди вышеуказанных наиболее распространены флуоресцентные метки.
3. Парамагнитные метки (также закрепленные на частицах латекса). Данный вид меток используется в ИХА с применением приборов, регистрирующих силу магнитного поля.
4. Ферментные метки используются по тому же принципу, что и в ИФА. Ферментативная реакция регистрируется с помощью окрашивания субстратов, и результат анализа является визуальным, или считывается с помощью датчика.
5. Новым направлением в разработке различных разновидностях ИХА является использование липосом в качестве носителей различного рода меток (красящих, флуоресцентных, ферментативных, электроактивных и пр.).

Альтернативные методы анализа в сравнении с иммунохроматографическим методом

Иммунохроматографический метод – это один из самых распространенных и простых методов анализа, который основан на взаимодействии антител с анализируемыми веществами. Однако существуют и другие альтернативные методы анализа, которые также обладают своими преимуществами и недостатками.

1. Флюоресцентная спектроскопия

Этот метод основан на измерении флюоресцентного излучения вещества после возбуждения его светом определенной длины волны. Он является чувствительным и точным, позволяет определять очень низкие концентрации вещества. Однако он требует специального оборудования и недоступен для широкого использования в бытовых условиях.

2. Газовая хроматография

Этот метод используется для разделения и определения состава сложных смесей веществ с помощью газовой фазы. Он обладает высокой разделительной способностью и широким спектром применения. Однако для его использования требуется специальное оборудование и высокая квалификация специалиста.

3. Вольтамперометрия

Этот метод основан на измерении тока, возникающего при окислении или восстановлении анализируемого вещества. Он обладает высокой чувствительностью и точностью, позволяет определять низкие концентрации вещества. Однако он требует специального оборудования и специализированной подготовки оператора.

4. Масс-спектрометрия

Этот метод основан на анализе масс-зарядового соотношения молекул анализируемого вещества. Он обладает высокой точностью и разрешающей способностью. Однако для его использования требуется сложное оборудование и специальная подготовка оператора.

Сравнение альтернативных методов анализа
Метод
Преимущества
Недостатки

Иммунохроматографический метод
Простота использования, быстрота результатов, возможность применения в полевых условиях
Ограниченная чувствительность и точность, зависимость от качества антител
Флюоресцентная спектроскопия
Высокая чувствительность, точность, возможность определения низких концентраций вещества
Требуется специальное оборудование, недоступность для бытового использования
Газовая хроматография
Высокая разделительная способность, широкий спектр применения
Требуется специальное оборудование, высокая квалификация специалиста
Вольтамперометрия
Высокая чувствительность, точность, возможность определения низких концентраций вещества
Требуется специальное оборудование, специализированная подготовка оператора
Масс-спектрометрия
Высокая точность, разрешающая способность
Требуется сложное оборудование, специальная подготовка оператора

Сущность метода

Принцип действия состоит в том, что при погружении тест-полоски в биологическую жидкость (или другой жидкий образец), она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с ней движутся нанесенные на нижнюю часть тест-полоски меченые специфические антитела, которые аффинно связываются с анализируемым веществом.

Различают 2 формата ИХА: прямой и конкурентный метод.

В схеме прямого (сэндвичного) ИХА используется конъюгат антитела-метка, нанесенный на мембрану для конъюгата. На тестовой линии иммобилизованы антитела, специфические к данному аналиту, а на контрольной линии — антивидовые антитела, специфические к первичным антителам. При нанесении образца, содержащего анализируемое вещество, при попадании образца на мембрану с конъюгатом, происходит связывание аналита с конъюгатом Ат-метка. Затем иммунный комплекс попадает в тестовую зону, где он связывается со специфическими антителами, образуя «сэндвич» Ат-Аг-Ат-метка. Избыток несвязавшегося конъюгата связывается с антивидовыми антителами на контрольной линии. Таким образом, выявление 2-х линий на тест-полоске является положительным результатом теста. При отсутствии аналита в образце конъюгат связывается с антивидовыми антителами только на контрольной линии, образуя одну линию на тест-полоске. Метод прямого ИХА используется для выявления высокомолекулярных соединений — вирусов, в том числе ВИЧ; различных гормонов (например, в тестах на беременность), возбудителей инфекционных заболеваний.
Метод конкурентого ИХА, используемый для определения низкомолекулярных соединений, основан на конкуренции аналита и иммобилизованного конъюгата аналит: белок-носитель за ограниченное количество центров связывания специфических антител, содержащихся в конъюгате Ат-метка. При нанесении образца, содержащего аналит, он связывается с конъюгатом Ат-метка на мембране с конъюгатом. Далее иммунокомплекс проходит через тестовую зону, где иммобилизован конъюгат аналит: белок-носитель. Иммунокомплекс не может связаться с этим конъюгатом из-за стерических затруднений: низкомолекулярные соединения обычно имеют одну антигенную детерминанту и, соответственно, антитела имеют один центр связывания с антигеном, который уже является занятым аналитом. Далее иммунный комплекс связывают антивидовые антитела, находящиеся на контрольной линии. В результате, отсутствие окрашенной полосы в тестовой зоне и наличие окраски в контрольной зоне свидетельствует о том, что концентрация определяемого вещества в исследуемом образце превышает его пороговое значение для данного теста.

При отсутствии анализируемого вещества в образце, конъюгат Ат-метка связывается с конъюгатом Аг: белок-носитель, иммобилизованным в зоне тестовой линии. Несвязавшийся конъюгат Ат-метка попадает в зону контрольной линии и связывается там с антивидовыми антителами. Таким образом, наличие двух окрашенных линий (тестовой и контрольной) является отрицательным результатом анализа.

Формат конкурентного ИХА используется для выявления низкомолекулярных соединений, в том числе метаболитов наркотических соединений в моче, жидкости ротовой полости, экстрактах тканей.

Преимуществом метода является быстрота его и легкость его применения, возможность использования неприборных форматов ИХА с визуальной оценкой результата анализа. В этом случае не требуется использование никакого оборудования и анализ может быть проведен неспециалистом в любых условиях, в том числе «полевых».

Существуют также приборные полуколичественные и количественные форматы ИХА, в которых используются специальные ридеры для регистрации интенсивности метки в тестовой зоне тест-полоски.

Методы иммунного анализа с использованием меченых реагентов

Метод использования меченных атомов основан на применении специфической и высокоактивной метки — маркера, позволяющего обнаружить продукт иммунной реакции.

Методы, основанные на применении меченных атомов обладают высокой специфичностью, чувствительностью, требуют минимального количества биоматериала. Они позволяют получать объективные, качественные результаты, осуществлять диагностику и скрининг на ранних стадиях заболевания с при минимальных изменениях в организме или объекте исследования.

К методам с использованием меченых реагентов относятся:

• радиоиммунный анализ — метод количественного определения биологически активных веществ (ферментов, гормонов, лекарственных веществ, маркеров злокачественных новообразований, наркотиков и других веществ) в биологических жидкостях; метод основан на конкурентном связывании определяемых или аналогичных меченных радионуклидами веществ со специфическими связывающими системами (специфическими антителами);
• флуоресцентный иммунный анализ, поляризационный флуоресцентный иммуноанализ — гетерогенный метод, основанный на том, что антигены тканей, микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флуорофорами, могут светиться в ультрафиолетовых лучах люминисцентного микроскопа;
• иммуноферментный анализ — высокоспецифический и высокочувствительный иммунохимический метод, позволяющий провести количественное и качественное содержание разных веществ, обладающих свойствами антител, антигенов, гаптенов;
• иммуноблоттинг — разновидность гетерогенного иммунного анализа, метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и иммуноферментного анализа, или электрофореза и радиоиммунного анализа;
• иммунохроматографический анализ — метод, основанный на принципе тонкослойной хроматографии и включающий реакцию между антигеном и соответствующим антителом в биологических материалах.

Особенности ИХА и ИФА

Иммуногистохимический анализ (ИХА) и иммуноферментный анализ (ИФА) – это методы иммунологического исследования, которые используются для обнаружения и локализации определенных молекул или антигенов в тканях организма.

Основные особенности ИХА и ИФА:

1. ИХА и ИФА основаны на использовании специфических антител, которые связываются с целевым антигеном и образуют иммунный комплекс.
2. ИХА осуществляется на специальных срезах тканей, которые могут быть получены путем биопсии или операционного материала, тогда как ИФА может проводиться с использованием различных типов образцов, таких как кровь, слюна и другие биологические жидкости.
3. ИХА позволяет обнаружить и локализовать конкретные антигены в исследуемой ткани, причем место связывания антитела с антигеном видно невооруженным глазом при помощи микроскопа. В ИФА, результат обнаружения антигена обычно фиксируется с помощью различных методов, таких как флуоресцентное осветление или использование ферментов, которые изменяют цвет и образуются конкретного антигена.
4. ИХА и ИФА являются высокочувствительными методами, что позволяет обнаруживать даже малые количества антигена в образце.
5. Оба метода имеют широкий спектр применения, включая исследование онкологических заболеваний, инфекционных и иммунных заболеваний, а также других патологических состояний.

Таким образом, ИХА и ИФА являются надежными и эффективными методами, которые широко применяются в медицине и научных исследованиях для обнаружения и анализа определенных молекул и антигенов в организме.

Применение ИХА и ИФА

ИХА и ИФА (Иммунохроматографический анализ и Иммуноферментный анализ) являются универсальными методами в иммунологическом исследовании. Они широко используются в различных областях, включая медицину, науку о пище и ветеринарию. Применение этих методов позволяет выявить антитела или антигены в биологических образцах, таких как кровь или моча, с высокой степенью точности и чувствительности.

В медицине ИХА и ИФА используются для диагностики и мониторинга различных заболеваний. Например, они могут быть использованы для выявления антител к инфекционным болезням, таким как ВИЧ или гепатит. Также эти методы могут быть применены для выявления антител к автоиммунным заболеваниям, таким как ревматоидный артрит или системная красная волчанка.

ИХА и ИФА также применяются в научных исследованиях. Они могут использоваться для изучения взаимодействия антител и антигенов, для исследования иммунного ответа на инфекции или для тестирования эффективности вакцин.

В области науки о пище ИХА и ИФА могут быть применены для выявления аллергенов или контаминантов в пищевых продуктах. Например, они могут использоваться для определения содержания аллергенов, таких как глютен или арахисовое масло, в пищевых продуктах.

В ветеринарии ИХА и ИФА могут быть использованы для диагностики и контроля здоровья животных. Они могут помочь выявить наличие инфекций, таких как бруцеллез или бешенство, а также помочь в изучении иммунного ответа животных на инфекции или вакцинацию.

ИХА и ИФА предоставляют ценные информацию о состоянии здоровья, а также помогают в научных исследованиях и контроле качества продуктов. Благодаря своей простоте, высокой чувствительности и точности, эти методы стали основой многих лабораторных исследований и диагностических процедур.

Цена проведения исследования крови

Иммунохимические анализы крови могут делиться на различные категории, а значит и ценовой диапазон будет разным:

1. Стандартное взятие венозной крови на иммунохимическое исследование обойдется человеку в пределах 170-200 рублей.
2. Если проводить посев мочи на чувствительность микроорганизмов к антибиотикам, то стоимость анализа будет дороже, примерно 900 рублей.

Иммунная реакция организма и состояние гормонального фона крайне важны. В случае каких-либо нарушений в этой области показан иммунохимический анализ крови.

Это наиболее точный метод выявления многих нарушений, таких как наследственные проблемы с иммунитетом, наличие или предрасположенность к опухолям, аутоиммунные нарушения, проблемы с зачатием.

Иммунохимический анализ крови назначается не так часто, как общий или клинический, поэтому не все знают, что он собой представляет. Иммунохимический анализ включает в себя множество показателей, которые позволяют оценить иммунную реакцию организма и определить гормональный фон. Это комплексный анализ, он считается более сложным и дорогостоящим, но очень точным в плане определения сопротивляемости организма тому или иному заболеванию.

Метод конкурентного ИХА [1], [2]

Данный метод основан на конкуренции

• аналита (антигенов) и
• иммобилизованного конъюгата аналита: белок-носитель (тестовая зона)

за ограниченное количество центров связывания в конъюгате Ат-метка.

При нанесении образца аналит связывается с конъюгатом Ат-метка на мембране, образуя иммунокомплекс. Тот уже проходит через тестовую зону (на ней иммобилизован конъюгат аналит: белок-носитель).

Допустим, в образце присутствуют антигены в большом количестве. В таком случае иммунокомплекс не может связаться с конъюгатом в тестовой зоне: низкомолекулярные соединения обычно имеют одну антигенную детерминанту (антитела имеют один центр связывания с антигеном) — а та уже занята антигеном из конъюгата.

Далее иммунный комплекс связывают антивидовые антитела на контрольной линии.

В результате, отсутствие окрашенной полосы в тестовой зоне и наличие окраски в контрольной зоне свидетельствует о том, что концентрация определяемого вещества в исследуемом образце превышает его пороговое значение для данного теста.

Таким образом,

При отсутствии анализируемого вещества в образце, конъюгат Ат-метка связывается с конъюгатом аналитом: белок-носитель, иммобилизованным в зоне тестовой линии. Несвязавшийся конъюгат Ат-метка попадает в зону контрольной линии и связывается там с антивидовыми антителами. Таким образом, наличие двух окрашенных линий (тестовой и контрольной) является отрицательным результатом анализа. То есть

— Об отрицательном результате нам будет говорить две окрашенные полосы (Т- и С-зоны).

Выводы о применимости и эффективности иммунохроматографического метода

Иммунохроматографический метод является широко применяемым и эффективным в различных областях, таких как медицина, ветеринария, пищевая промышленность и окружающая среда. Он представляет собой быструю и надежную аналитическую технику, основанную на специфическом взаимодействии антител с анализируемыми молекулами.

Преимущества иммунохроматографического метода:

Быстрота. Результаты анализа можно получить всего за несколько минут

Это особенно важно для срочных ситуаций и экстренных диагностических случаев.
Простота использования. Метод не требует специальных навыков или сложного оборудования

Практически любой человек может провести анализ с помощью тест-полосок иммунохроматографии.
Малые объемы образца. Для проведения анализа требуется всего несколько капель крови, мочи или другого биологического материала.
Низкая стоимость. Иммунохроматографические тесты относительно недороги по сравнению с другими методами анализа, такими как ЖК-спектроскопия или ВЭЖХ, что делает их более доступными для использования в разных сферах.
Высокая чувствительность и специфичность. Иммунохроматографический метод позволяет обнаруживать анализируемые молекулы даже в низких концентрациях и отличать их от других компонентов образца.

Иммунохроматографический метод широко используется для анализа различных аналитов, таких как инфекционные агенты, гормоны, наркотики, аллергены и др. Он находит применение для диагностики заболеваний, контроля качества пищевых продуктов и воды, а также в исследованиях научных и медицинских целей.

Эффективность иммунохроматографического метода подтверждена множеством исследований и широким применением в практической медицине и других отраслях. Благодаря своим преимуществам, этот метод может быть использован для быстрой диагностики и скрининга, контроля терапии и мониторинга состояния пациента. Он является надежным инструментом, способным помочь в обнаружении и предупреждении различных заболеваний и проблем.